曹筱琛1，贾飞2，陶巧凤12*（1.浙江工业大学药学院，杭州 310014；2.浙江省食品药品检验研究院，杭州 310004）
摘要：目的对地塞米松磷酸钠注射液中的杂质I进行研究。方法 通过考察辅料与地塞米松磷酸钠相互作用，研究杂质I的产生机理；采用HPLC-QTOF-MS联用技术鉴定杂质I；制备和纯化获得杂质I，并对其结构进行确证。结果杂质I为主成分与抗氧剂亚硫酸氢钠在高温下的加成产物。结论本研究结果对地塞米松磷酸钠注射液的工艺改进以及质量控制具有指导作用。
Characterization of Impurity I in
Dexamethasone Sodium Phosphate
Injection
CAO Xiaochen1, JIA Fei2, TAO Qiaofeng1 2* (1.College of Pharmaceutical Science, ZheJiang University
of Technology, Hangzhou 310014,China; ZheJiang Institute for Food and Drug Control, HangZhou 310004, China)
ABSTRACT OBJECTIVES To study on the impurity I in dexamethasone sodium phosphate injection. METHODS The interaction between drug and excipient was investigated to identify the cause of raising impurity I,and HPLC-QTOF-MS was adopted to identificate the
structure of impurity I,the impury I was synthesized and separated by prep-HPLC, and its structure was proved.RESULTS The impurity I is the adduct of dexamethasone sodium phosphate and antioxidant sodium bisulfite.CONCLUSION The study offers guidances for improving the manufacturing process and the quality control of dexamethasone sodium phosphate injection.
K EY WORDS dexamethasone sodium phosphate injection;related substance;impurity I;HPLC-MS;prep-HPLC;NMR;quality control 地塞米松磷酸钠(16a-甲基-11β,17a,21-三羟基-9a-氟孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮-21-磷酸酯二钠盐）为肾上腺皮质激素类药物，具有抗炎、抗内毒素、抑制免疫、抗休克及增强应激反应等药理作用，临床用于自身免疫性疾病、过敏、炎症、哮喘及皮肤科等多种疾病[1]。地塞米松磷酸钠注射液为地塞米松磷酸钠的灭菌水溶液，国内外药典均有收载，中国药典2010年版二部[2]增订了原料药和注射液有关物质检查，采用 HPLC 法对注射液中地塞米松、杂质I和其他杂质进行控
制，但未明确杂质I的结构信息。国内此品种有几十家生产企业，市售产品有关物质差异很大，杂质I最大量超出限度数倍，目前尚未见关于地塞米松磷酸钠注射液中杂质I研究的报道, 本文研究地塞米松磷酸钠注射液中杂质I的存在情况、产生机理、制备并确证其结
作者简介：曹筱琛，女，在读硕士研究生研究方向：药品质量分析与控制通讯作者：陶巧凤，女，主任药师, 研究方向：
药物分析Tel: (0571)86459402, E-mail:
构，为地塞米松磷酸钠注射液的质量控制和标准修订提高、工艺改进提供依据。
1 仪器和试药
岛津LC20-AT高效液相谱仪，Agilent 1290高效液相谱仪，Agilent 6538Q-TOF质谱仪，岛津LC-20AP制备液相谱仪，Varian Mercury核磁共振波谱仪，Sartorius MC5电子天平，旋转蒸发仪(型号：R-215，瑞士BUCHI公司)，紫外可见分光光度计(UV2550型，日本岛津公司)。
甲醇(谱纯，Merck 公司) ，乙酸铵(谱纯，SIGMA-ALDRICH 公司)，乙酸(谱纯，SIGMA-ALDRICH公司)，氢氧化钠(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)，Milli-Q纯化水(Millipore, Bedford, USA)，地塞米松磷酸钠对照品（中国药品生物制品检定所, 批号：100016 -200914），地塞米松对照品
（中国药品生物制品检定所，批号：0129-9702），地塞米松磷酸钠原料药（浙江仙琚制药股份有限公司提供），地塞米松磷酸钠注射液（市售）。
2 实验条件
2.1 液相谱
液相谱柱: Agilent -C18(4.6 mm×150 mm,5μm)；柱温:40℃；检测波长:254nm；流速: 1.0 mL·min-1；进样量: 20μL。流动相A为甲醇-水-乙酸盐缓冲液（35:35:30），流动相B为甲醇-乙酸盐缓冲液（70:30）（乙酸盐缓冲液：乙酸铵0.77g，加水1000mL，溶解后用乙酸调节pH至4.0）
梯度洗脱：
10%B(0min-3.5min),10%-40%B(3.5min-23.5min),40%-95%B(23.5min-34.5min),95%B(34.5min-59.5min),95%-10%B(34.5min-59.5min)]。
2.2质谱
离子源为ESI，质量分析器为四极杆飞行时间, 正离子检测模式, 离子扫描范围 m/z 100～1000，离子源前进样分流比为3:1。离子源参数：毛细管电压 3.5kV，喷雾电45psig，脱溶剂气(N2)流量为10 mL·min-1，干燥气温度 350 ℃，碎裂电压120 V，碰撞能量 15 eV。
3 液相谱法考察有关物质
3.1 谱条件选择
本文参照美国药典[3]地塞米松磷酸钠<；谱纯度>项下液相谱条件进行HPLC和HPLC-MS分析，将流动相中乙酸盐缓冲液浓度从100mmol/L降低至10mmol/L以减小乙酸铵的抑制效应，调整后的液相谱条件见2.1，新液相谱条件能有效检测杂质I和地塞米松等有关物质，杂质I的相对保留时间约为0.25，与中国药典方法一致。在酸、碱、光、热和氧化等强制降解试验中，主峰和杂质峰分离良好，表明该谱条件能满足有关物质测定要求。
3.2 有关物质测定
取地塞米松磷酸钠原料药及注射液适量，加流动相制成每1mL 中约含地塞米松磷酸钠0.5mg的溶液，以“ 2.1”项下谱方法对地塞米松磷酸钠原料药和注射液进行有关物质考察。杂质I在原料药中未发现(图1(A))。市售注射液中主峰前出现一明显杂质峰，其相对
保留时间约0.25，应为杂质I ；主峰后的杂质峰为主药的水解产物地塞米松(图1(B))。可见杂质I 是注射液中新增杂质，其极性大于主成分。
3.3 杂质I 来源分析
3.3.1 强力破坏试验
地塞米松磷酸钠为地塞米松C 21磷酸酯的水溶液钠盐，化学性质不稳定，依据不同生产厂家的说明书，其注射液处方中辅料有pH 值调节剂磷酸氢二钠、磷酸二氢钠，抗氧剂焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠等，其中亚硫酸盐类抗氧剂因其可显著减缓药物氧化，在注射剂中最常用
[4]。另有报道地塞米松磷酸钠热稳定性差[5]，故不同灭菌工艺对有关物质产生有一定影响。根据以上分析，结合对原料药的强力破坏试验结果，考察辅料抗氧剂对主成分地塞米松磷酸钠的影响。将处方量地塞米松磷酸钠和亚硫酸氢钠混合，配制成适宜浓度的样品溶液，进行酸、碱、氧化、光照、加热强力破坏试验，并将不加抗氧剂的地塞米松磷酸钠溶液采用相同条件处理，作空白对照溶液。酸、碱、氧化、光照破坏样品溶液和相应的空白对照溶液均未出现杂质I ，热破坏样品溶液中出现一未知杂质峰，相对保留时间约为0.25。见图1(C)
（A ） （B ） （C ） 010203040未知杂质 地塞米松
buchimin min 01020 30 40 min 0 1020 30 杂质I
地塞米松
40 地塞米松磷酸钠 地塞米松磷酸钠 地塞米松磷酸钠
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